细胞培养——传代培养

细胞培养（细胞克隆技术），是一种在人为创造的与体内环境相似的条件下（无菌*、温度和ph适宜、营养条件良好），培养和维持生物细胞的生长和增殖的技术。而传代培养是细胞培养中的一项关键步骤，它涉及将已培养的细胞从一个培养皿或容器中分离出来，并将它们重新种植到新的培养皿或容器中，以继续细胞的生长和扩增。传代培养有助于保持细胞的健康状态、增加细胞数量以提供大量可用于实验的细胞。

细胞培养——传代培养根据细胞种类不同一般可分为贴壁培养和悬浮培养两大类型。

一、贴壁培养

贴壁培养一般是指贴壁依赖型细胞附着在培养皿或培养瓶的底部，以在表面附着生长。这种培养方法广泛应用于生物医学研究和生产中，尤其是在体外细胞研究和药物开发领域。

贴壁培养操作步骤：

1. 传代前观察细胞形态与密度，细胞生长密度为80%-90%时，适宜传代。

2. 弃掉培养液，用PBS清洗1-2次。

3. 加入可覆盖整个培养瓶底的含EDTA的胰蛋白酶。

4. 将培养瓶放进37°C恒温CO2培养箱中，2-5分钟后于显微镜下观察，当70%-80*细胞收缩，间隙变大后，轻轻拍打培养瓶后加入培养液中止消化（2倍胰蛋白量），混合均匀以免消化过度。

5. 将细胞悬液以1000rpm/min离心3~5min。（根据细胞种类的不同，可调整转速和时间）

6. 丢弃上清液，重悬细胞，轻晃拍打，使细胞均匀。

7. 取适量细胞悬液，重新接种，摇匀放于37°C恒温CO2培养箱。

8. 观察细胞生长状态，以进行换液、传代。

二、悬液培养

悬浮培养是指细胞在受到不断搅动或摇动的液体培养基中以悬浮状态生长，而不是附着在培养器具的表面上。这种培养方法适用于许多不附着于固体表面的细胞类型，如血液细胞、淋巴细胞、某些肿瘤细胞等。

悬液培养操作步骤：

1. 直接传代

立起细胞瓶，使细胞沉降，吸取1/2-2/3上清去掉，再重悬细胞，接种至新培养瓶中，摇匀，放于培养箱中培养。

2. 离心传代法

将细胞悬液以1000rpm/min离心3~5min，弃除上清液，重悬细胞，摇匀，将适量悬液接种之新培养瓶中，补足营养液，摇匀，放于培养箱中培养。

细胞培养——传代培养维持细胞生长、获得大量用于实验的细胞，确保实验结果的可靠性，是科研中极为重要的一环。

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