细胞培养——原代培养

细胞培养是现代生物学和医学研究的基础，为我们提供了研究和理解细胞行为的关键工具。在细胞培养的广泛应用中，原代细胞培养是一项重要的技术，允许科学家们从组织中获取原始的、未经过传代的细胞，这一过程扩展了我们对生命科学的认知。

细胞培养——原代培养是指使用从组织或器官中直接分离的原始细胞，没有经过连续传代。这种培养会因为细胞的不断生长繁殖，导致空间、营养物质、代谢废物的积累等细胞生长条件变差，使得细胞生长缓慢，甚至死亡，所以只能维持有限的时间。

原代培养的核心便是从活体组织中分离并培养细胞，因此我们需掌握原代培养的操作步骤。

一、取材

对于不同的组织，有着对应的取材方式，操作过程中应确保材料新鲜，使用锋利的器械以尽可能减少机械损伤，并且操作环境要严格无菌。

肿瘤取材需避开坏死、液化的区域并尽可能于肿瘤细胞多的地方取材；皮肤、黏膜取2-3m㎡；取血细胞、羊水细胞、骨髓细胞等时需注意抗凝。

二、分离

因样品多种细胞紧密结合，不适宜在体外生长繁殖，故必须将样品组织充分散开，将细胞解离开，才能得到适合体外环境培养的细胞。根据组织类型的不同我们选取不同的分离方法，如血液、胸水、腹水等细胞悬液多采用离心分离，其他实体组织材料分离采取机械分散法、剪切分离法、消化分离法等，如：皮肤、黏膜、内脏、肿瘤等。

1. 细胞悬液分离

血液、羊水、胸水等细胞悬液，一般采用500-1000r/min的低速离心5-10分钟（根据不同的细胞可调整转速与离心时间），避免转速过高、时间过长、以避免机械损伤细胞。因离心后由于各种细胞的比重不同，故在分层液中形成不同层，如此可根据需求选择分液层，以得到理想的细胞。

2. 实体组织材料分离

A. 机械分散法：一些软组织可剪刀剪切、吸管吹打分散细胞；或将充分剪碎的组织放于注射器中，通过九号针头压等方法。此方法虽快速，但机械损伤大，分离效果差。

B. 剪切分离法：将组织剪成糊状，加入营养液反复捶打，再低速离心弃上清即可。

C. 消化分离法

（a）酶消化法：常用胰蛋白酶、胶原酶。将组织放入酶溶液后，水浴加热，过滤离心弃上清，重悬接种。

（b）非酶消化法：常用EDTA（又称螯合剂，全名乙烯二胺四乙酸）进行处理。

三、培养

原代培养分为组织快速培养法、消化培养法、悬浮细胞培养法、3D细胞培养、类器官培养。前两种方法简单高效，而3D细胞培养与类器官培养，其培养环境更接近人体内，培养环境更加真实，可适用于高通量药物筛选，在探索药物、医疗、癌症等方向极具前景。将分离的细胞接种到培养瓶，放于37°C CO2恒温培养箱中即可。

细胞培养——原代培养提供了研究生物学和医学的关键起点，为科学家们深入了解生命过程和疾病机制提供了宝贵的机会。改进、深究细胞培养——原代培养能使我们在药物研究、医学探索、癌症治愈等道路上走的更加扎实、迅捷。

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