【产品简介】

BrainBits小鼠游离皮质培养试剂盒，提供完整的培养服务，包含从新鲜组织开始培养所需的一切。E18组织用2ml含B27的THRYVE胚胎储存介质运送。立即使用组织能获得 的细胞产量，但注意组织可在4-8°C下保存一周。这个试剂盒是研究人员为下一代研究人员提供刚刚开始的可能性的实践方法，十分适用于科研。

产品包括：1瓶分离的E18小鼠皮质细胞、12毫升NbActiv1、1个带橡胶球的火抛光移液器、1对PDL涂层盖板。

【使用方法】

一、制剂（无菌罩室温）：

1. 将80μl台普兰蓝（Sigma T8154）加入0.5ml试管中进行下面的步骤4。

2. 12ml NbActiv1™至室温。

3. 将2ml分离的初级神经元管置于30℃水浴中加热1分钟。

 

二、细胞分散（无菌罩室温）：

1. 用硅化巴斯德移液管，将整个试管的内容物转移到无菌15ml离心管中。

2. 旋转1100rpm (200 x G)， 1分钟。丢弃上清，留下约50μl含有微球的THRYVE胚胎wanquan液。

3. 分散细胞颗粒（用手指或管轻弹管底部），重悬于1ml NbActiv1™中。

4. 将20μl细胞液加入含有80μl台盼蓝（1:5稀释）的0.5ml试管中。

5. 使用血细胞计（计算细胞/ml）或使用当前的实验室程序计数细胞。

三、细胞电镀（无菌罩室温）：

1. 用NbActiv1™稀释0.2ml/cm2的细胞，用16000个细胞/cm2或所需浓度的平板。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%湿度（或环境O2）孵育。

3. 4天后，神经元显示轴突和树突；突触和动作电位开始于7天。

4. 每3-4天用新鲜的37℃CO2平衡NbActiv1™更换一半的培养基。

四、细胞镀96孔板：

1. 用NbActiv1™以0.2ml/cm2稀释细胞，并以10,000个细胞/孔（SD）和35,000个细胞/孔（C57/BL6）或所需的浓度进行平板稀释

浓度。

2. 将钢板放在工作台顶部（而不是在引擎盖下），并将边缘用薄膜包裹15-20分钟，使其均匀沉降。

3. 除去副膜，37℃，5% CO2, 9% O2, 95%湿度（或环境O2）孵育。

4. 4天后，神经元显示轴突和树突；突触和动作电位开始于7天。

5. 每3-4天用新鲜的37℃CO2平衡NbActiv1™更换一半的培养基。

五、可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）冲洗两次。

2. 用15mg/ml双醋酸荧光素的丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶的水原液配制染料混合物。

将每种15μl稀释到1.5ml HBSS中（1:100稀释）。

3. 在步骤1中加入的0.2ml HBSS中加入20μl染料混合物（1:10稀释）。

4. 约1分钟后，使用适合荧光素荧光的蓝色激励（绿色细胞）计数活细胞。计数死细胞

绿色激发为碘化丙啶荧光（小红核）。

5. 生存能力=（绿色细胞/单位面积）/（总细胞数/单位面积）或生存=绿色细胞/（绿色+红色细胞）。

【产品目录表】

SKU	产品名称	产品品牌
KTC57EDCX	小鼠游离皮质培养试剂盒	Transnetyx Tissue BrainBits

 

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