预活化层析填料介绍

色谱填料又称层析介质，指填充在色谱柱中具有纳米孔道结构的微球材料，粒径一般在微米尺度，纳米孔道的孔径大小在5-200 nm范围内。色谱填料的形貌、结构、粒径大小和分布、孔径大小和分布、基质及表面功能基团等都影响着色谱填料的性能，其中基质影响着色谱填料的各种物理性能，比如机械强度、载量等，表面功能基团则影响着分离模式和分离选择性，即色谱填料的使用方向。色谱填料根据分离模式可分为预活化层析填料、凝胶过滤层析填料、疏水层析填料、离子交换层析填料、亲和层析填料和多模式层析填料等。

预活化层析填料可以偶联一个特定的配基，制备成一个可以纯化一种或者几种目标分子的亲和填料。例如，可以使用抗体、抗原、酶、受体、小的核酸或者多肽作为配基，纯化能与它们结合的相应的配体。

BioToolomics开发了多种预活化层析填料，可以高效、快速、简便、安全地偶联各种功能配体。预活化填料的基质是由琼脂糖制成的，具有亲水性强、非特异性吸附低的特点，并且基质已被高度交联，具有很高的机械强度。

制备预活化亲和层析柱的注意要点：

（一）配基的选择

通常情况下，当配基分子量＜5 KDa时，需要间隔臂；对于大分子配基，间隔臂不是必须的选择条件。例如，NHS活化琼脂糖层析填料有一个长间隔臂（11个原子），特别有助于固定结构受限的配体。而CNBr则没有间隔臂，对于小分子配基（＜5KDa），当配基和样品结合的时候，由于CNBr没有间隔臂，可能会由于空间位阻而影响结合。因此当配基分子量＜5 KDa时，建议使用NHS活化配基填料。对于大于5KDa的配基，二者差异不大。

（二）偶联方法的选择

配基是通过其功能基团的反应偶联到基质上，所以偶联方法的选择取决于配基的特性。、羧基、CNBr、醛基活化琼脂糖填料通过配基的伯胺基团进行偶联，这几种最主要的区别是NHS和羧基含有间隔臂，而CNBr和醛基没有间隔臂，此外，NHS和羧基能耐受较高的pH值。可通过与羟基形成的稳定醚键固定糖和其他碳水化合物，它们也可用于偶联含伯胺或含硫醇的分子。通过形成稳定的腙键偶联含醛或酮的配体。

        北京百奥创新科技有限公司提供Biotoolomics的各种预活化层析填料，详细信息请咨询百奥创新客服。