PEI转染试剂特点及常见问题

一、PEI线性转染试剂

        PEI又称为线性化聚乙烯亚胺，是人工合成的含有高密度正电荷的有机大分子阳离子聚合物。PEI与DNA通过正负电荷的相互吸引形成复合物，是较为有效的聚阳离子型基因载体，转染效率高。PEI转染试剂可以方便地进行化学修饰，并且不会像脂质体一样破坏细胞结构，所以相对毒性较低。

二、PEI Max转染试剂(24765-1)特点

·转染效率高，细胞毒性低；

·蛋白表达量高；

·节约成本：PEI至少能够降低40%的转染试剂总成本；

·适用于HEK293等真核细胞的转染；

·适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染；

·适用于有血清和无血清的转染条件；

·无机试剂，无动物源成分；

·产品稳定，质控严格；

·工艺流程适用范围广，容易优化，适合小规模培养板、培养瓶到大规模的生物反应器。

三、PEI转染试剂性能

图1 转染PEI后的抗体表达

500mL HEK293细胞(A、C、E)和CHO细胞(B、D、F)细胞培养物转染LPEI、PEI Max和PEI pro^TM。采用蛋白-A HPLC法检测单克隆抗体曲妥珠单抗(A、B)、Palivizumab单抗(C和D)和B72-3(E和F)的滴度，与LPEI(PEI 25K)相比，当使用PEI Max和PEI pro^TM时，三种抗体的表达量都较高，但使用PEI Max试剂转染能使所有抗体都有最高表达。由此可见，PEI Max转染试剂(MW 40000)具有更高的转染效率。

四、转染中的常见问题

1.转染效率低

原因：(1)细胞活力：使用活力好传代小于15代的细胞。

(2)细胞接种密度高/低：适当降低/增加接种密度。

   (3)PEI/DNA比率不合适：进行不同基因转染时应对PEI和DNA的比例进行优化，以达到最适比例。

(4)质粒片段较大：可根据实际实验需要调整，如适当增加转染质粒总量等。

   (5)混合方式不当：质粒DNA和PEI溶液混合时避免涡旋。同时要注意PEI加入 DNA溶液中的顺序。

2.细胞毒性高

原因：(1)转染液孵育时间过长：过长时间 PEI/DNA 复合体会导致细胞毒性。

(2)细胞接种密度低：适当增加接种密度。

(3)PEI/DNA比例高：优化合适的PEI和DNA的比例。

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